Błędne zmiany w genie Fibulin 5 i związane z wiekiem zwyrodnienie plamki cd

Próbki od wszystkich 402 pacjentów z AMD i wszystkimi 429 kontrole przeszukiwano pod kątem zmiany Gln5346Arg w eksonie 104 genu fibuliny 6 opisanej przez Schultza i wsp.22 przy użyciu denaturującego testu wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Trzy próbki, dla których potwierdzono zmianę Gln5346Arg, potwierdzono za pomocą automatycznego, dwukierunkowego sekwencjonowania DNA. Różnice w częstości zmian sekwencji kodujących między pacjentami z AMD i kontrolnymi oceniano za pomocą dokładnego testu Fishera. Aby ocenić ewolucyjną konserwację reszt ze zmiennymi sekwencjami, wykorzystaliśmy program nukleotydowy BLAST i opublikowaliśmy wyrażone znaczniki sekwencji. Każdy ekson z genu ludzkiej fibryny 5 zastosowano do identyfikacji homologicznych znaczników sekwencji wyrażanych w wielu gatunkach. Ekspresowane znaczniki sekwencji użyte do późniejszej analizy wykazywały co najmniej 80 procentową zgodność z sekwencją ludzką. W analizie ekspresji fibryny 5 metodą odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej (RT-PCR), całkowite RNA ekstrahowano z neurosensorycznej siatkówki i nabłonka barwnikowego siatkówki oka od dorosłego dawcy za pomocą minipresek Qiagen RNeasy. . Jeden mikrogram RNA traktowanego DNazą poddano odwrotnej transkrypcji w losowej reakcji primowanej z odwrotną transkryptazą SuperScriptIII. Następnie 25-ng porcje tego materiału amplifikowano za pomocą PCR.
Wyniki
Tabela 1. Tabela 1. Liczba różnych wariantów sekwencji. Tabela 2. Tabela 2. Warianty aminokwasów. Tabela 3. Tabela 3. Warianty aminokwasów u pacjentów i kontroli. Znaleźliśmy 114 różnych odmian sekwencji genów dla fibuliny 1, 2, 4, 5 i 6 (Tabela 1). Spośród nich 62 procent nie powinno zmieniać struktury kodowanego białka, podczas gdy reszta (38 procent) zmieniłaby jeden lub więcej aminokwasów. W tabeli 2 wymieniono wszystkie obserwowane zmiany aminokwasów, jak również ich rozmieszczenie u pacjentów i osób z grupy kontrolnej. Wszystkie z tych dwóch zmian były tak rzadkie, że obserwowano je tylko w stanie heterozygotycznym. Dwie wspólne zmiany – Ser361Gly w fibulinie 2 i Ile2419Thr w fibulinie 6 – były obserwowane w stanie homozygotycznym u niektórych osobników, ale częstotliwości homozygotyczności były takie same wśród pacjentów i osób kontrolnych i były zgodne z obecnością równowagi Hardy ego-Weinberga. Tabela 3 pokazuje liczbę pacjentów i kontrolnych, którzy mieli jeden lub więcej wariantów aminokwasów w danym genie fibuliny. Tylko fibulina 5 wykazała znaczący związek między zmianami aminokwasów a AMD (P <0,01 według dokładnego testu Fishera). Fibulina 2 i fibulina 6 miały bardzo często występującą zmianę aminokwasów, która występowała z jednakową częstością wśród pacjentów i kontroli (tabela 2). Po usunięciu tych zmian z analizy, pozostałe warianty tych genów nadal nie były istotnie związane z fenotypem AMD (Tabela 3).
Zmiany Gln5346Arg w fibulnie 6 zgłaszane przez Schultza i współpracowników22 obserwowano u dwóch pacjentów z AMD i jednym obiektem kontrolnym. Jednak ta kontrola miała w przeszłości zdjęcia zrobione w naszej klinice jaskry, a dokładna analiza tych zdjęć ujawniła kilka małych, okrągłych druzów w pobliżu głowy nerwu wzrokowego, które miały podobny wygląd do tych u pacjentów z fibuliną. 5 zmian.
Rysunek 1
[patrz też: dronedaron, klimakterium, bifidobacterium ]
[podobne: luivac opinie, deka steryd, enterosol ]