infolinia cilest

Kontrolne przeciwciała nie rozpoznające swoistych determinantów mysich (BD PharMingen) zastosowano do korekcji fluorescencji tła i ustawiania bramek do analizy. Łącznie zebrano i przeanalizowano sumy co najmniej 20 000. 100 000 zdarzeń na próbkę przy użyciu FACSCalibur (BD Biosciences, Palo Alto, California, USA) i pakietu oprogramowania CellQuest (BD Biosciences) wersja 3.1 (5) lub FCSPress (Cambridge, Wielka Brytania) . Wzbogacanie populacji makrofagów za pomocą perełek magnetycznych. Leukocyty wątroby zebrano, zawieszono przy <1 × 107 komórek / ml i zablokowano przeciwciałem 2,4G2. Aby szczególnie wzbogacić się o migrujące makrofagi (21), komórki zabarwiono znakowanymi FITC CD11b (BD PharMingen) i PE-F4 / 80 (Serotec). Komórki CD11b + wzbogacono przy użyciu mikroperełek MultiSort anty-FITC i kolumn do selekcji pozytywnej, a następnie odczynnika do uwalniania MultiSort, jak opisano przez producenta (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Niemcy). Po rozdzieleniu, pozytywną selekcję dla komórek PE-F4 / 80 + przeprowadzono stosując perełki magnetyczne i kolumny magnetyczne PE (Miltenyi Biotec GmbH). Komórki F4 / 80 + CD11b + zostały wzbogacone o ponad 90%. Analizy cytokin. Próbki homogenatów wątroby i leukocytów wątroby CM badano na MIP-1. lub IFN-y przez ELISA. MIP-1. wykrywano za pomocą komercyjnego zestawu do kanapek ELISA, zgodnie z zaleceniami producenta (R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA). IFN-. wykrywano za pomocą szczurzego anty-IFN-y myszy mAb (F-18, HyCult biotechnology bv, Uden, Holandia) jak opisano (22). Histologia i immunohistochemia. Przygotowano skrawki wątroby, wybarwiono hematoksyliną i eozyną (H & E) i analizowano pod mikroskopem (1). W analizach immunohistochemicznych sekcje zostały zablokowane, a IFN -. /. białko wykrywano jak opisano (22). Obrazy zostały zebrane cyfrowo za pomocą systemu Roper Scientific Photometrics CoolSNAP Camera System (Roper Scientific Inc., Trenton, New Jersey, USA) i przetworzone przy użyciu Adobe Photoshop (Adobe Systems Inc., Mountain View, Kalifornia, USA). Testy handlu in vivo. Leukocyty szpiku kostnego izolowano i znakowano czerwonym barwnikiem fluorescencyjnym PKH26 (Sigma-Aldrich) (1, 16). Znakowane komórki dostarczano dożylnie i umiejscowiono w wątrobach myszy biorcy 24 godziny po przeniesieniu. Skrawki wątroby przygotowano jak opisano (1), zamontowano w VECTASHIELD (Vector Laboratories Inc., Burlingame, California, USA) i obserwowano za pomocą mikroskopu Microphot-SA (Nikon, Tokio, Japonia) (1, 16). Komórki w wątrobowych sinusoidach oznaczano ilościowo przez zliczanie komórek fluorescencyjnych w określonych obszarach reprezentatywnych tkanek wątroby przy powiększeniu x100. Obrazy zostały zebrane cyfrowo za pomocą suwaka Spot RT z firmy Diagnostic Instruments Inc. (Sterling Heights, Michigan, USA) i przetworzone przy użyciu Adobe Photoshop. Analizy statystyczne. Istotność statystyczną wyników doświadczalnych analizowano za pomocą dwustronnego testu Student-owego, gdzie wskazano. Wyniki Akumulacja komórek NK wątroby podczas zakażenia MCMV. Komórki NK gromadzą się i lokalizują w ogniskach zapalnych wątroby podczas infekcji MCMV myszy C57BL / 6 (1, 23). Aby scharakteryzować akumulację komórek NK u innego szczepu myszy, skrawki wątroby barwione H & E przygotowano z C57BL / 6 i 129 myszy, które były niezakażone lub zakażone MCMV przez 48 godzin. Ogniskowe skupienie komórek jądrzastych między obszarami portalu i żyłami centralnymi typowymi dla zapalenia komórek NK obserwowano po zakażeniach obu szczepów (Figura 1, aib). W celu ilościowego oznaczenia wydajności komórek NK (NK1.1 + TCR-A lub DX5 + TCR-A) w tym przedziale wytworzono leukocyty, a proporcje i liczby komórek NK określono za pomocą cytometrii przepływowej i całkowitego odzyskania komórek. Wydajność leukocytów wątroby wzrosła po zakażeniu do 4 x 106. 3 × 105 od niezainfekowanych wartości 2 × 106. 2 x 105 u myszy C57BL / 6 i 3 x 106. 4 × 105 od niezainfekowanych wartości × 106. × 105 u 129 myszy
[patrz też: monoterapia, dysplazja włóknisto mięśniowa, dezaftan control ]