jelito nadwrażliwe leki

IFN -. /. wpływ na akumulację komórek NK to MIP-1. zależne i na MIP-1. ekspresja zależy od rekrutacji makrofagów wytwarzających MIP-1 do wątroby. Podsumowując, wyniki te dają nowy wgląd w IFN -. /. funkcjonuje i wykazuje wyjątkową ścieżkę regulacji odpowiedzi chemokin wymaganych do lokalizacji wrodzonych mechanizmów obronnych antywirusowych. Metody Myszy. Myszy specyficzne dla patogenu C57BL / 6 i 129 / Sv zakupiono odpowiednio z The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA) lub Taconic Laboratory Animals and Services (Germantown, Nowy Jork, USA). Hodowla par homozygotycznych MIP-1. mutanty, C57BL / 6-MIP-1 (17), z The Jackson Laboratory zostały użyte do założenia kolonii na Uniwersytecie Browna. Myszy funkcjonalnie pozbawione IFN -. /. w wyniku mutacji receptora, 129-IFN-y / rR. (18), zostały pierwotnie uzyskane od B & K Universal Ltd. (North Humberside, Wielka Brytania), ale także zostały wyhodowane i utrzymywane na Brown University. Samce i samice myszy stosowano pomiędzy 5 a 6 tygodniem życia. Obsługę myszy i procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi. Wirusy, infekcje i protokoły leczenia in vivo. Wprowadzono zapasy ekstraktów ślinianek Smith-strain MCMV (2). Infekcje zapoczątkowano w dniu 0 (niezakażonym) za pomocą 5 x 104 (umiarkowana dawka) jednostek tworzących łysinki (PFU) MCMV, lub gdy wskazano x 104 (niska dawka) PFU MCMV, drogą dootrzewnową. W doświadczeniach dotyczących przeżycia myszy oceniano dwa razy dziennie. Zwierzęta traktowane in vivo rekombinowanym ludzkim IFN-a A / D (rIFN-a) (Pestka Biomedical Laboratories, New Brunswick, New Jersey, USA), biologicznie aktywny u myszy, podano trzy dootrzewnowe codzienne iniekcje x 105 jednostek w PBS zawierającym 0,1% BSA. Zwierzęta kontrolne otrzymały zastrzyki pojazdów. Przygotowanie leukocytów, homogenatów tkankowych i pożywki kondycjonowanej. Leukocyty wątrobowe i homogenaty izolowano i przygotowano w sposób opisany uprzednio (5, 19). W celu wytworzenia kondycjonowanych pożywek leukocytowych (leukocytarny CM) komórki zawieszono w pożywkach RPMI (Life Technologies Inc., Rockville, Maryland, USA) zawierających 5% FCS i inkubowano w 37 ° C przez 24 godziny. Supernatanty pozbawione komórek zebrano i zastosowano w analizach cytokin. Poziomy produkcji wyrażono jako ng / g wątroby w homogenatach lub jako pg / milion komórek w CM. Analizy cytometrii przepływowej. Proporcje i liczby komórek oceniono zgodnie z doniesieniami (5). Do identyfikacji komórek NK u myszy C57BL / 6 zastosowano następujące przeciwciała: skoniugowany z koniugatem R-fikoerytryną (sprzężony z R-PE3) anty-NK1.1 klonu PK136 i skoniugowany z cKhrom anty-TCR-y. łańcuch monoklonalny klonu H57-597 (BD PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA). Ponieważ myszy na tle 129 nie wykazują ekspresji NK1.1, komórki NK były również identyfikowane przez następujące przeciwciała: skoniugowany z biotyną anty-pan-NK mAb klon DX5, a następnie streptawidyna-allofikocyjanina (APC), skoniugowany z CyC anty-TCR- . łańcuch monoklonalny klonu H57-597 i skoniugowany z R-PE p anty-CD122 (receptor łańcuchowy IL-2 i receptor IL15A) mAb klon TM (1 (BD PharMingen). W przedstawionych badaniach komórki zidentyfikowane jako DX5 + (20) były 74. 90% dodatnie dla CD122. Ponieważ komórki NK konstytutywnie eksprymują CD122, ten marker pomógł zidentyfikować DX5 + TCR-. Komórki NK. Aby odróżnić migrujące od miejscowych makrofagów (21), zastosowano następujące przeciwciała: skoniugowane z anty-F4 / 80 R-PE3 (Serotec Ltd., Kidlington, Oxford, Wielka Brytania) i skoniugowany z allofikocyjaniną klonu mAb anty-CD11b M1 / 70 (BD PharMingen) lub skoniugowane z biotyną przeciwciało anty-F4 / 80 (Serotec), a następnie streptawidyna-allofikocyjanina i skoniugowany z FITC klon M1 / 70 anty-CD11b mAb (BD PharMingen). Te ostatnie przeciwciała zastosowano do identyfikacji makrofagów znakowanych czerwonymi fluorescencyjnymi PKH26 (Sigma-Aldrich, St
[hasła pokrewne: deka steryd, dentech rzeszów, szkoła podstawowa w zagórzu ]