Mutacja okołoporodowego łańcucha ciężkiego miozyny powiązanego z wariantem złożonym Carneya czesc 4

Dwaj członkowie rodziny (III-2 i III-4) wymagali operacji paliatywnej ręki i jednej (III-19) operacji stóp. Genetyczna heterogeniczność kompleksu Carneya
Aby określić przyczynę CNC-TPC, przeprowadziliśmy analizy genetycznych powiązań w rodzinie 1. Połączenie z PRKAR1A zostało wykluczone; Wyniki dla jod mniejsze niż -2,0 uzyskano przy użyciu mikrosatelitów chromosomu 17q24, w tym wewnątrzgenowego mikrosatelity9 PRKAR1A (punktacja lod = -10,6, . = 0). Sekwencyjna i denaturująca wysokosprawna chromatografia cieczowa genu PRKAR1A w rodzinie nie wykazała żadnych zmian. Analizy dotyczące mikrosatelitów chromosomu 2p16 (D2S337: lod score = -6,5, . = 0, D2S391: lod score = -8,0, . = 0) również wykluczyły wiązanie. Limfoblasty pochodzące od jednego członka rodziny (I-1) miały prawidłowy kariotyp 46, XY. Tak więc doszliśmy do wniosku, że kompleks Carney jest genetycznie heterogenny i że zmutowany gen w nowym locusie powoduje CNC-TPC w Family 1.
Analiza sprzężeń genetycznych CNC-TPC
Rysunek 2. Figura 2. Analiza wielopunktowej analizy CNC-TPC z użyciem mikrosatelitu chromosomu 17p w rodzinie 1. Genotypy rodziny na mikrosatelitach D17S1583, D17S1852 i D17S1808 zastosowano do określenia punktacji wielopunktowej lod przy 17 p12-13,1. D17S1583 jest arbitralnie wykreślany przy 0 cM i odnotowywane są inne mikrosatelity. Pokazano 18-cM przedział genomowy zawierający locus CNC-TPC, oparty na 95-procentowych przedziałach ufności. Zaobserwowano, że maksymalna liczba punktów PK wynosząca 4,39 była przy 16,6 cM.
Następnie przeprowadziliśmy losowe przeszukiwanie genomu genu choroby CNC-TPC w rodzinie 1. Po wykluczeniu 55 procent genomu, zaobserwowaliśmy połączenie z chromosomem 17p12-13,1 z maksymalnym wynikiem dla pary lod równym 4,14 (w locus D17S1852). Analiza wielopunktowa dała pik wyników wynoszącą 4,39, co odpowiada prawdopodobieństwu 24 500: 1, że gen choroby CNC-TPC w Family mapuje do tego locus (Figura 2). Analizy haplotypów (nie pokazano) sugerowały, że gen choroby CNC-TPC umiejscowiony jest do 4,5 Mb między mikrosatelitami D17S1812 i D17S947.
Analiza genu kandydata i identyfikacja mutacji MYH8
Inspekcja locus CNC-TPC ujawniła skupisko genów łańcucha ciężkiego miozyny, w tym extraokularnych, embrionalnych, okołoporodowych i trzech dorosłych łańcuchów ciężkich miozyny szkieletowej.22-24 Mutacje w innych genach sarcomerycznych powodują artrogrypozę.18-20 Dlatego z wyjątkiem miozyny pozagałkowej uważaliśmy, że te geny miozynowe są idealnymi kandydatami do genu choroby CNC-TPC, a my sekwencjonowaliśmy ich regiony kodujące. Nie obserwowano mutacji w embrionalnych lub dorosłych genach miozyny szkieletowej.
Ryc. 3. Ryc. 3. Mutacyjna analiza MYH8 Exon 16 w CNC-TPC. W panelu A eksonu 16 amplifikowano za pomocą PCR z genomowego DNA wyizolowanego z dotkniętych członków rodziny i poddano analizie sekwencji. Heterozygotyczne przejście od G do A (strzałka) odnotowano dla nukleotydu 2094. Oczekuje się, że ten wariant koduje mutację missense R674Q w MYH8. Panel B przedstawia wyniki analizy polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych fragmentu egzonu 16 z MYH8 w dwóch elementach rodziny 1. Amplikon o wielkości 326 bp zawierający ekson 16 strawiono enzymem restrykcyjnym TspRI i analizowano za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym.
[więcej w: hurtownia portfeli, ambroksol, agaricus ]
[hasła pokrewne: nfz kielce praca, gimnazjum zagórz, płyn w worku osierdziowym ]