ortopeda warszawa lindleya

Względne wartości intensywności przedstawiają skorygowaną wartość dla każdej próbki, konkretną w porównaniu z amplifikacją 18-S (× 100). Immunohistochemia. W analizach immunohistochemicznych skrawki wątroby przygotowywano, blokowano, eksponowano na przeciwciała i wykrywano enzymatycznie jak opisano (2). Białko Mig zidentyfikowano kozim poliklonalnym przeciwciałem IgG wytworzonym przeciwko rekombinowanej myszy MIG (R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA). Skrawki inkubowano z przeciwciałami przez noc w 4 ° C, płukano w PBS plus 0,1% Tween-20 (Sigma Chemical Co.), a następnie inkubowano przez 30 minut ze skoniugowanym z biotyną-SPp fragmentem F (ab.) 2 przeciw koziej IgG ( Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, Pennsylvania, USA). Równoważne stężenia koziego IgG zastosowano jako przeciwciała kontrolne (Sigma Chemical Co.). Specyficzność barwienia udokumentowano brakiem reakcji z przeciwciałami kontrolnymi i pod nieobecność przeciwciała pierwszorzędowego. Skrawki wybarwiono kontrastowo za pomocą zieleni metylowej (Vector Laboratories, Burlingame, California, USA). Migracyjne populacje komórek mierzono ilościowo przez zliczenie ciemnoniebieskich zarodkowanych komórek w sumie 20 losowo wybranych obszarów x mm2 reprezentatywnych sekcji wątroby przy powiększeniu x 400. Pokazane zdjęcia zostały wykonane w opisany sposób (2). Analizy statystyczne. Istotność statystyczną wyników doświadczalnych analizowano za pomocą dwustronnego testu t-Studenta, gdzie wskazano. Wyniki Zmiany zależne od MIP-1. W proporcjach przedziałowych i liczbie komórek NK. W celu oceny i oznaczenia ilościowego komórek NK w poszczególnych przedziałach, wyizolowano śledzionę, krew i próbki wątroby od myszy niezakażonych lub zakażonych MCMV w szczytowym czasie zapalenia (tj. 48 godzin po zakażeniu). Normalny C57BL / 6-MIP-1 A + / + (MIP-1 P +) i C57BL / 6-MIP-1 rt /. (MIP-1A) myszy badano. Wytworzono leukocyty i określono proporcje i liczbę komórek NK (tj. Komórki NK1.1 + CD3a w śledzionie i krwi oraz komórki NK1.1 + TCR-in w wątrobie) przy użyciu 2-kolorowej cytometrii przepływowej i analizy wydajności komórek . Częstotliwość komórek NK i liczby bezwzględne były równoważne w śledzionie (dane nie pokazane), krwi (Figura 1, a i b) i wątrobie (Figura 1, c i d) leukocytach wyizolowanych od niezakażonych MIP-1 (3 + i MIP-1. . myszy. W 48 godzin po zakażeniu MCMV, w podobny sposób zmniejszyły się w śledzionach MIP-1 (3 + i MIP-1. myszy (dane nie pokazane). Przeciwnie, po 48 godzinach, zakażone MCMV MIP-1 (3 + i MIP-1. myszy miały 3- i 7-krotny wzrost częstości komórek NK krwi (Figura 1a), odpowiednio. Ponieważ całkowita wydajność komórek leukocytów we krwi dla MIP-1 (3 + i MIP-1. myszy miały 6,5 × 106. 5 × 105 / ml i 5 × 106. 7 × 105 / ml, odpowiednio, MIP-1 myszy miały statystycznie istotną 2-krotnie większą liczbę komórek NK we krwi (Figura 1b). Zatem zakażenie w obecności lub nieobecności MIP-1. indukuje wzrost krążących komórek NK, ale MIP-1. Niedobór powoduje dalsze gromadzenie się populacji we krwi. Figura Zmiany w komórkach w populacjach komórek NK. Leukocyty krwi (a i b) oraz wątroby (c i d) przygotowano z C57BL / 6-MIP-1 (3 + / + (MIP-1 (3 +) lub C57BL / 6-MIP-1 A / l. (MIP-1A) myszy niezainfekowane lub zakażone MCMV przez 48 godzin. Leukocyty analizowano za pomocą cytometrii przepływowej, jak opisano w Metodach. Zarówno procent (a i c), jak i bezwzględna liczba (b i d) NK1.1 + CD3. komórki na mililitr krwi lub NK1.1 + TCR-. przedstawiono komórki na całą wątrobę. Dane to środki. SE (n = 3). Zmiany przedziałowe przedstawiają wyniki z z 3 powtarzających się eksperymentów. Różnice między kontrolą MIP-1. + I MIP-1 są znaczące, AP <0,01, BP <0,001. Wyniki dla wątroby różniły się od wyników dla śledziony lub krwi. Gdy całkowita liczba leukocytów wątroby wzrosła do 5 × 106. 106 od niezainfekowanych wartości 4 × 105. 0, myszy MIP-1 (3 + + miały 14-krotny wzrost liczby komórek NK po 48 godzinach po zakażeniu MCMV (Figura 1d) [hasła pokrewne: opatanol cena, dezaftan control, zagorz ]